Media TSB

Tanggal Praktikum                           :   19 Desember 2012

Tempat                                               :   Laboratorium Biologi STABA  

I.                  Tujuan

·         Membuat media TSB

·         Mengetahui fungsi media TSB

II.               Prinsip

Intisari enzimatik kasein dan intisari enzimatik dari bungkil kedelai yang nitrogen sumber di TSB. Dextrose adalah energi sumber karbon yang memfasilitasi pertumbuhan organisme. Sodium Chloride mempertahankan keseimbangan osmotic, fosfat di potassium adalah agen tuffering.

III.           Landasan Teori

Tryptic Soy Broth, media tujuan umum, sering disebut sebagai kedelai kazsein medium digest, disingkat TSB. Media ini awalnya dikembangkan untuk digunakan tanpa darah dalam menentukan efektivitas sulfonamide tedrhadap pneumocci dan organisme lainnya. Clostridia dan non bersporulasi anaerob tumbuh subur dalam kaldu ini ketika diinkubasi anaerobic. TSB dianjurkan untuk pengujian kontaminan bakteri dalam kosmetik dan sesuai dengan standar yang ditetapkan dalam makanan dan industry.

TSB dipilih oleh USDA Hewan dan Tumbuhan Kesehatan Layanan direkomendasikan oleh Komite Nasional untuk standar laboratorium Klinik (NCCLS) untuk inokulum persiapan dalam tes harddisk difusi. TSB sesuai dengan Harmonized Amerika Serikat Pharmacopeia (USP) Eropa Pharmacopeia (EIE), dan Jepang Pharmacopeia (JP).

TSB ditambah dengan SPS dan CO adalah kaldu yang sangat baik untuk kultur darah di klinik aplikasi. Dengan penambahan NaCl 6,5% TSB dapat digunakan untuk pertumbuhan selsktif dari kelompok D-Streptokokus.

IV.           Alat dan Bahan

Alat	Bahan
-          Tabung reaksi 30 buah	-          Trypticase Soy Broth
-          Rak Tabung 3 buah
-          Batang Pengaduk
-          Gelas kimia 250 mL
-          Aquadest
-          Gelas ukur 25 mL
-          Bunsen
-          Kaki tiga + kasa asbes
-          Oven
-          Pipet Tetes
-          Autoclave

V.               Perhitungan

Perhitungan Pembuatan Media Cair TSB

           Pembuatan TSB 30 tabung

= 30 tabung @ 6 mL

= 30 x 6 mL

= 180 mL

TSB 30 gram / 1L

180 mL à

             = 5,4 gram dalam 180 mL aquadest

VI.           Langkah  Kerja :

Pembuatan TSB 30 tabung sebanyak 180 mL @ 6 mL

1.      30 tabung disterilisasi dengan oven selama 2 jam dengan suhu 160⁰ C

2.      Ditimbang 5,4 gram

3.      Dimasukkan 5,4 gram dalam gelas kimia 250 mL ditambah 180 mL aquadest

4.      Dipanaskan sampai larut sambil diaduk

5.      Dituangkan TSB sebanyak 6 ml  ke tiap – tiap tabung

6.      Dibungkus dari bawah dan diberi bundle

Sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121^oC selama 15 menit

7.      Diangkat, diberi label identitas media, nama dan tanggal pembuatan

VII.        Pengamatan

Media berbentuk cair, berwarna kuning jernih

VIII.    Pembahasan

TSB (Trypticase Soy Broth) adalah medium dasar untuk menumbuhkan berbagai mikroorganisme. Trypticase Soy Agar digunakan untuk medium pertumbuhan dengan tujuan: mengamati morfologi koloni, mengembangkan kultur murni, pertumbuhan untuk tes biokimia. TSA juga biasa digunakan untuk penghitungan jumlah bakteri.

TSB adalah media brothdiperkaya untuk tujuan umum, untuk isolasi, dan penumbuhan bermacammikroorganisme. Media ini banyak digunakan untuk isolasi bakteri dari spesimenlaboratorium dan akan mendukung pertumbuhan mayoritas bakteri patogen.Media TSB mengandung kasein dan pepton kedelai yang menyediakan asam aminodan substansi nitrogen lainnya yang membuatnya menjadi media bernutrisi untukbermacam mikroorganisme. Dekstrosa adalah sumber energi dan natrium kloridamempertahankan kesetimbangan osmotik. Dikalium fosfat ditambahkan sebagaibuffer untuk mempertahankan pH.Trypticase Soy Agar digunakan untuk medium pertumbuhan dengan tujuan:mengamati morfologi koloni, mengembangkan kultur murni, pertumbuhan untuktes biokimia. TSA juga biasa digunakan untuk penghitungan jumlah bakteri.

Penimbangan media dilakukan secara hati-hati dan teliti. Trypticase Soy Broth ditimbang sebanyak 5,4 gram, kemudian dilarutkan  dalam aquadest 180 ml sambil dipanaskan sampai larut.

Selanjutnya media disterilisasi dengan autoclave, sebelum ke autoclave media tabung ditutup dengan bundle,dan diikat karet, hal ini dilakukan karena autoclave akan memberikan tekanan yang tinggi yang dapat menekan bundle lepas dari mulut tabung, sehingga penutup bundle harus terikat kuat dalam mulut tabung .

IX.           Diskusi

 Pemanasan media berfungsi untuk mempercepat kelarutanbubuk media

    Trypticase Soy Broth

   Media TSB mengandung kasein dan pepton kedelai yang menyediakan asam aminodan substansi nitrogen lainnya yang membuatnya menjadi media bernutrisi untukbermacam mikroorganisme

X.               Kesimpulan

   Media TSB merupakan media yang bernutrisi yang dapat berfungsi

sebagai penyubur yang mengandung kasein dan pepton kedelai yang

menyediakan asam amino dan substansi nitrogen lainnya yang

membuatnya menjadi media bernutrisi untuk bermacam

mikroorganisme

   Media TSB berbentuk cair dan berwarna kuning jernih

Media Mac Conkey

Tanggal Praktikum                           :   19 Desember 2012

Tempat                                               :   Laboratorium Biologi STABA  

I.            Tujuan :

·         Membuat media Mac Conkey

·         Mengetahui fungsi media Mac Conkey

II.         Prinsip Kerja

Ø  MCA berisi lactose sebagai sumber energy yang akan difermentasikan bakteri, garam empedu dan kristal violet sebagai inhibitor, neutral red sebagai indicator.

Ø  Sejumlah serbuk media MCA ditimbang, dilarutkan dalam aquadest, dipanaskan hingga larut, disterilisasi dengan autoclave 125⁰C selama 15 menit.

III.     Landasan Teori :

 Mac Conkey Agar adalah salah satu jenis media yang digunakan untuk identifikasi mikroorganisme. Mac Conkey agar termasuk dalam media selektif dan diferensial bagi mikroba. Jenis mikroba tertentu akan membentuk koloni dengan ciri tertentu yang khas apabila ditumbuhkan pada media ini.

Bakteri gram negatif yang tumbuh dapat dibedakan dalam kemampuannya memfermentasikan laktosa. Koloni bakteri yang memfermentasikan laktosa berwarna merah bata dan dapat dikelilingi oleh endapan garam empedu. Endapan ini disebabkan oleh penguraian laktosa menjadi asam yang akan bereaksi dengan garam empedu.^[1]

Bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa biasanya bersifat patogen. Golongan bakteri ini tidak memperlihatkan perubahan pada media.Warna koloni dapat dilihat pada bagian koloni yang terpisah.^[1]

Beberapa contoh pertumbuhan koloni pada Mac Conkey Agar^[1]:

• Salmonella dan Shigella : serupa media
• Escherichia coli: merah dikelilingin zona keruh
• Enterobacter dan Klebsiella : merah muda dan mukoid

IV.        Alat dan Bahan

No	Alat
1	Cawan Petri
2	Gelas Ukur 100 ml
3	Batang Pengaduk
4	Spirtus,kassa,asbes
5	Spatula
6	Kertas Timbang
7.	Air aquadest
8.	Gunting
9	Kapas
10	Kassa
11	Neraca
12	Mac Conkey agar 51,5 g/L
13	Erlenmeyer 250 ml 2 buah

V.               Perhitungan

Mac Conkey Agar =51,5 g/L

1 Plate =20 ml

20 Plate =20 X 20 = 400 ml

MCA yang ditimbang =  X 51.5 g/L

                                         = 20,6 g/400 ml

VI.           Langkah Kerja

1.      Preparasi alat dan bahan yang akan digunakan.

 

2. Dibuat bundel penutup Erlenmeyer

4. Ditimbang Mac conkey agar sebanyak 10,3 gram secara tekhnis( 2x penimbangan)

3.Sterilisasi cawan petri, kedalam oven dengan suhu 1600 C selama 2 jam.

 

              

4.      Dimasukkan ke dalam Erlenmeyer 250 ml, ditambahkan aquadest 200 ml.

5.      Dipanaskan sambil diaduk sampai semua agar larut.

6.      Diangkat Erlenmeyer, mulut Erlenmeyer ditutup pake bundle,kertas dan diikat karet.

11. Dibungkus kertas, dan diberi identitas nama media dan tanggal pembuatan.

10.  Dituangkan kedalam cawan petri steril secara aseptic. Setelah beku dibalik

2.                        8. Diangkat dari autoclave, didinginkan dalam incubator sampai suhu 40-50 0C

1.            7. Dimasukkan ke dalam autoclave, 1210 C selama 15 menit.

 

VII.     Hasil Pengamatan

Media Mac Conkey berwarna merah keunguan  muda dan bertekstur padat

VIII. Pembahasan

Mac Conkey agar termasuk dalam media selektif dan diferensial bagi mikroba. Jenis mikroba tertentu akan membentuk koloni dengan ciri tertentu yang khas apabila ditumbuhkan pada media ini.

Persenyawaan utama dalam media ini adalah laktosa, garam empedu, dan merah netral sebagai indikator warna. Media ini akan menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dengan adanya garam empedu yang akan membentuk kristal violet. Bakteri gram negatif yang tumbuh dapat dibedakan dalam kemampuannya memfermentasikan laktosa. Koloni bakteri yang memfermentasikan laktosa berwarna merah bata dan dapat dikelilingi oleh endapan garam empedu. Endapan ini disebabkan oleh penguraian laktosa menjadi asam yang akan bereaksi dengan garam empedu.^[1]

Bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa biasanya bersifat patogen. Golongan bakteri ini tidak memperlihatkan perubahan pada media. Ini berarti warna koloninya sama dengan warna media. Warna koloni dapat dilihat pada bagian koloni yang terpisah.^[1]

Beberapa contoh pertumbuhan koloni pada Mac Conkey Agar^[1]:

• Salmonella dan Shigella : serupa media
• Escherichia coli: merah dikelilingin zona keruh
• Enterobacter dan Klebsiella : merah muda dan mukoid

Penimbangan media dilakukan secara hati-hati dan teliti dengan meggunakan neraca analitik.

Pada praktikum dilakukan penimbangan sebanyak 10,3 gram  agar yang dilarutkan dalam aquadest. Pemanasan dilakukan supaya  agar larut sempurna.

Selanjutnya media disterilisasi dengan autoclave, sebelum ke autoclave media ditutup dengan bundle,dan diikat karet, hal ini dilakukan karena autoclave akan memberikan tekanan yang tinggi yang dapat menekan bundle lepas dari mulut erlenmeyer, sehingga penutup bundle harus terikat kuat dalam mulut erlenmeyer .

Penuangan media ke cawan petri dilakukan secara aseptis dan steril,

           penuangan dilakukan di dekat api.

IX.        Diskusi

Ø Dalam media Mac Conkey terdapat garam empedu yang berfungsi sebagai penghambat bakteri gram positif.

Ø Pemanasan dilakukan supaya agar mudah larut.

X.            Kesimpulan :

    Media Mac Conkey berwarna ungu muda dan bertekstur padat.

    Media Mac Conkey merupakan media selektif dan differensial bagi bakteri khususnya bakteri gram negative basil seperti Salmonella, Shigella, Hidrocolera, E. Coli..